细胞系开发流程ELISA实验中阴性本底的形成原因

ningxueqin · 发表于 2023-2-21 22:07:22

　　在酶联固相免疫实验中，尤其在间接ELISA法中，显示链接经常会碰到阴性本底的问题。主要是本底过高和不同标本的本底值差异较大。本底或称背景，是ELISA中的非特异性显色。底物未经过酶作用而呈现的颜色称为空白。底物液如配制不当会出现一定的空白值。这个空白值只要不太高（A＜0.05），可从各测定值中减除，并不影响实验结果。这里讨论的是不含待测抗原或抗体的阴性标本在ELISA中出现的本底。从理论上来说，只有阴性标本最终才能引起显色反应，那么，为什么会出现本底呢？接下来就为大家介绍一下阴性本底的形成原因。
　　固相载体的吸附：在酶免疫测定中，ELISA的特点是利用分离游离和结合的酶结合物的手段。固相载体与吸附在其上的抗原或抗体形成固相抗原或固相抗体，即免疫吸附剂（Immu-nosorbent）。通常所用的固相载体聚苯乙烯其表面主要是疏水基团，通过疏水键与蛋白质结合。这种物理性吸附是非特异性的，虽然蛋白质的分子量、等电点、浓度等对吸附的量有一定的影响，但总的来说各种蛋白质均能吸附在聚苯乙烯载体的表面。因此除在包被时有目的地使抗原或抗体吸附在载体上外，在ELISA各个步骤中均有可能发生干扰物质的吸附，使最终产生与受检抗原——抗体反应无关的显色，这是形成阴性本底的主要原因。
　　只有正确认识阴性本底的形成原因，才能处理在实验过程中出现的相关问题，对症下药，所以大家一定要多加注意。

		自动登录	找回密码
密码			立即注册