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酶联免疫吸附法(ELISA)是指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上,进行免疫反应从而对液体生物标本中微量物质进行测定的定性和定量方法。
这一方法的基本原理是:
①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。
②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。显示链接用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入反应底物后,底物被酶催化转化为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。
ELISA检测具有灵敏度高、特异性强、操作简单、样本量少等特色,且检测结果准确度高,重复性好,在临床及科研的抗原抗体检测及病原体检测方面得到了广泛的使用。目前市面上ELISA试剂盒品牌驳杂,检测指标种类、别名繁多,产品质量参差不齐,我们应该怎么挑选适用的ELISA试剂盒产品呢?有哪些指标是需要我们考虑的呢?
首先,客户需要明确实验目的是做靶标功能性测定还是含量检测。功能性测定一般是酶及底物的反应,对生物活性的分析。而Elisa专用于靶标分子的含量检测。其次,如果所研究指标为蛋白质或多肽,可以到Uniprot数据库(显示链接)查询对应的的Uniprot ID,在选择产品时同时核对指标名和Uniprot ID;如果所研究指标为小分子半抗原,此类化学物质可以到ChemSpider化学品库(显示链接)查询对应的CAS号,结合CAS号选择需要的产品。
然后,我们还需要根据已有文献查询或预判靶标在生物样本中的有无或含量区间,针对性选择灵敏度足够的试剂盒,同时和厂商确认试剂盒的适用样本是否包含客户自己的实验样本。
在此基础上,如果客户有多种品牌的同类产品可以选择,还应比较试剂盒产品的多项性能参数,包括灵敏度、特异性、精密性、准确度、线性、稳定性、天然样本数据。这些参数是ELISA作为一种人为建立的微量分析方法为确保其有效性和可信度所必须考量的内在固有的特性。
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