稳定细胞系构建服务消除组织培养污染的小技巧

ningxueqin

　　当重要的培养污染时，显示链接研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
　　1）在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。
　　2）分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
　　3）每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。
　　4）确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2-3代。
　　5）在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
　　6）重复步骤4。
　　7）在无抗生素的培养基中培养4-6代，确定污染是否以已被消除。